Análisis microbiológico de las muestras de suelo
El análisis
microbiológico del suelo es un proceso importante para conocer la salud de
este, así como las funciones que desempeñan los microorganismos en la
productividad agrícola, puesto que el suelo es un ecosistema biológico rico en
microorganismos estimándose que en 1 gramo de este existe alrededor de 107
a 109 de microorganismos entre bacterias y hongos. Además, los
microorganismos presentes en el suelo se encargan de la descomposición y
circulación de la materia orgánica y nutrientes (Wydro, 2022).
De modo que, para el análisis microbiológico es necesario realizar varios pasos:
Toma de muestras
1. Se toma muestras del
suelo a analizar. La toma de muestras fue realizada en el campus de Querochaca
de la Universidad Técnica de Ambato en la provincia de Tungurahua, realizada en
un lote de terreno de forma rectangular dividido en cuatro pedazos, de manera
que al equipo 1 le correspondió el lote#1 con coordenadas -1.370549, -78.607616.
2. La toma de las
muestras se realizó con ayuda de un barreno a 20cm de profundidad (actividad
microbiana a esa profundidad) y después de homogenizadas las muestras en un
balde desinfectado se pasó las muestras a fundas ziploc debidamente rotuladas.
3.
Las muestras fueron llevadas al laboratorio para su análisis.
Preparación
de la muestra
4.
Una vez recibidas las muestras en el laboratorio, se realizó la preparación,
siendo una fase importante para iniciar con el análisis de la materia orgánica,
para ello se tamizó las muestras de suelo por un colador con la finalidad de
separar piedras, grava, trozos de vidrio u otro tipo de componentes no
deseados.
5.
Se pesó en una balanza analítica 5 gramos de muestra de suelo tamizado.
6.
Posteriormente, se llevó los 5 gramos de suelo a un frasco tapa rosca azul con
45ml de agua peptonada (solución madre) en condiciones asépticas y se lo agitó
en un vortex hasta que se homogenizara completamente.
Diluciones
seriadas
7. En
condiciones asépticas se empezó a realizar las diluciones seriadas, de modo
que, con un micropipeta se pipeteó 1mL de la solución madre a un tubo de ensayo
con 9mL de agua peptonada siendo la dilución 10-2.
8. Seguidamente
con una punta nueva se volvió a tomar 1mL, pero esta vez del tubo 10-2
y se depositó en un tubo de ensayo con 9mL de agua peptonada obteniéndose la dilución
10-3.
9.
Se repitió el procedimiento dos veces mas hasta obtener una dilución 10-5.
Siembra microbiológica
10.
Una vez obtenida la dilución 10-5, en una cabina de flujo laminar y
bajo condiciones y bajo condiciones asépticas se sembró la solución 10-5
en una placa con medio de cultivo PCA y PDA.
11. Primero,
se esterilizó el asa de siembra y una vez enfriada se destapó el tubo con la
dilución 10-5 flameando la boca en el mechero de alcohol para
seguidamente introducir el asa en el tubo 10-5, hasta que se haya
tomado parte de la solución en el asa.
12. Seguidamente,
se flameó nuevamente la boca del tubo en el mechero de alcohol y se tapó con un
sola mano posicionándolo nuevamente en la gradilla.
13. Con
la otra mano manteniendo el asa con la solución cerca del mechero se destapó la
caja Petri con el medio PCA y se realizó estrías con el asa.
14. Se
tapó nuevamente la caja Petri y se volvió a esterilizar el asa para la
siguiente siembra.
15. Finalmente,
se realizó el mismo proceso para realizar la siembra con el medio PDA.
Obtención de resultados
Una vez que fueron
incubadas las placas Petri en los medios PCA y PDA a 37.0 °C y 27.5 °C respectivamente,
después de 72 horas se fue a revisar los resultados en los que el equipo 1 obtuvo
un crecimiento de microorganismos en la placa con medio PCA.
En la placa Petri con medio de cultivo PDA al revisar, se obtuvo que el crecimiento de hongos fue nulo, pues la caja Petri no presentaba ningún tipo de crecimiento, esto pudiéndose deber según Wydro (2022), a que el método convencional de cultivo de microorganismos en placas en condiciones de laboratorio solo permite detectar menos del 1% del total de microorganismos presentes en el suelo. Además, la mayoría de los microorganismos del suelo no pueden ser cultivados en el laboratorio debido a que carecen de las condiciones adecuadas de crecimiento en los medios de cultivo artificiales.
Es así que, el tipo de
microorganismos que pudieron estar presentes en las muestras de suelo son
especialmente especies de Mortierella, Geomyces, Lysobacter y Chaetomium, puesto
que el terreno al estar en presencia principalmente de árboles frutales de hoja
caduca. En donde estudios han demostrado que los índices de diversidad bacteriana
del suelo de manzano son más altos que los de otros suelos de árboles frutales
de hoja caduca. Siendo Mortiella del género de hongos más abundante y
con un correlación más positiva para el crecimiento de plantas; Geomyces
por su parte, puede formar micorrizas con las raíces de las plantas, permitiendo
que las plantas se adapten a ambientes bajos en nutrientes; Chaetomium por
otro lado, considera como una fuente rica de metabolitos secundarios novedosos
y bioactivos, con aplicaciones prometedoras (Si et al., 2018).
Bibliografía:
Si,
P., Shao, W., Yu, H., Yang, X., Gao, D., Qiao, X., Wang, Z., & Wu, G.
(2018). Rhizosphere
Microenvironments of Eight Common Deciduous Fruit Trees Were Shaped by Microbes
in Northern China. Frontiers in microbiology, 9, 3147.
https://doi.org/10.3389/fmicb.2018.03147
Wydro, Ú. (2022). Soil Microbiome study based on DNA Extraction: A Review. MDPIAG, 14(24), 3999. https://doi.org/https://doi.org/10.3390/w14243999
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